分子克隆专题真核表达系统中polyA
真核表达系统中polyA加尾信号的作用是什么? mRNA3’末端的polyA尾巴可防止外切核酸酶对mRNA3末端的降解,增加mRNA的稳定性。此外,在翻译过程中,polyA可起到“翻译增强子”作用。研究表明,去除polyA位点,mRNA表达水平的降低最高可达10倍。polyA加尾信号需要3部分:①多聚腺苷酸化信号序列5’-AAUAAA-3’;②剪切位点和加尾位点YA;③下游保守序列,如U-rich或(G+U)-rich。 知识拓展 真核生物基因表达载体元件除了polyA加尾信号外,还有选择标记基因和报告基因。选择标记基因是表达载体的重要组成元件,通常编码一种正常细胞中不存在的酶。在选择压力下,选择标记基因虽然可使少量的转化细胞从未转化的细胞中分离出来,但选择标记基因的应用也有其自身无法克服的缺陷。例如,当一个转化细胞中已含有一个抗性基因作为标记基因时,在导入第二个外源基因时,要选用不同的选择标记基因,而实际被应用的选择标记基因是非常有限的。此外,从健康及安全角度来看,选择标记基因及其产物被使用时可能是有毒的或过敏的。因此,在转基因中,将选择标记基因去掉,有利于提高转基因的食用安全性和对环境的安全性,也可对同一个受体细胞进行多次转基因操作。 报告基因主要起报告和识别作用,它的表达产物对受体细胞无毒性,可反映外源基因在受体细胞中的表达水平。 扫码 |
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